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pGEM?-T Vector System I

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其它组分:

pGEM?-T Vector【子货号:A362A,包装:1 x 1.2μg,,运保温度:-20℃】
Control Insert DNA【子货号:A363A,包装:1 x 12μl,,运保温度:-20℃】
2X Rapid Ligation Buffer【子货号:C671A,包装:1 x 200μl,,运保温度:-20℃】
T4 DNA Ligase【子货号:M180A,包装:1 x 100u,,运保温度:-20℃】

描述:

pGEM??-T 载体系统是克隆PCR 产物的方便系统。pGEM?-T载体是通过EcoRV 酶切pGEM?-5Zf(+) 载体,并在两个3`末端加入胸腺嘧啶构建的。pGEM?-T 载体插入位点3`-T 突出端可极大提高PCR 产物的连接效率,因为3`-T突出端可以防止载体的自身环化,并且为某些热稳定性聚合酶产生的PCR 产物提供匹配碱基。这些聚合酶常常以模板不依赖模式在扩增产物的3` 端加上一个脱氧腺苷酸聚合物。
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pGEM??-T 载体多克隆区T 突出端的两侧均有BstZI 酶切位点,使用BstZI 单酶消化即可释放插入片段。也可选用适当的双酶消化释放插入片段。pGEM??-T载体系统II 除了pGEM??-T 载体系统I 所有成分外,还包括JM109 感受态细胞。

pGEM?-T和pGEM?-T Easy 载体系统可用于PCR产物的克隆。这两种载体是通过 EcoRⅤ酶切pGEM?-5Zf(+)和pGEM? -T Easy载体,并在3’末端加入胸腺嘧啶构建的。插入位点3’-T突出端可提高PCR产物的连接效率,因为3’-T突出端可以防止载体的自身环化,并且为热稳定性聚合酶产生PCR产物提供匹配碱基。这些聚合酶常常以不依赖模板方式在扩增产物的3’端加上一个脱氧腺苷酸混合物。?? pGEM?-T和pGEM?-T Easy高拷贝数载体包含有T7和SP6 RNA聚合酶启动子,其侧翼和多克隆位点区相接,多克隆位点区位于β半乳糖苷酶的α肽编码区内。α肽插入失活允许在指示培养基用颜色直接筛选重组克隆。另外这两个载体的多克隆位点区的限制性酶切位点适用于采用Promega公司Erase-a-Base?系统(产品目录号#E5750)产生一系列巢式缺失体。???
pGEM?-T和pGEM?-T Easy 载体的多克隆位点区含有一些这样的限制性酶切位点,采用这些酶进行单酶切消化即可释放插入片段。如pGEM?-T Easy 载体多克隆区的EcoRⅠ、BstZⅠ和NotⅠ酶切位点。而pGEM?-T 载体多克隆区只有一种这样的酶切位点BstZⅠ。这两种载体也可选用适当的双酶切消化释放插入片段。??
pGEM?-T和pGEM?-T Easy 载体含有丝状噬菌体f1复制起始子,可用于制备单链DNA?

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产品 包装 目录号
pGEM?-T 载体系统Ⅰ
20个反应 A3600
包括:
1.2μg ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?pGEM?-T 载体(50ng/μl)?
12μl ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?插入DNA对照(4ng/μl)
100 U ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? T4DNA连接酶
200μl ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?T4DNA连接酶的2×快速连接缓冲液
? ? ? ?1 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 操作手册

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特点:

快速连接:使用2X 快速连接缓冲液(2X Rapid Ligation Buffer)可以使连接反应在室温下1 小时内完成。

蓝/ 白筛选:载体包含有T7 和SP6 RNA 聚合酶启动子,分别位于β - 半乳糖苷酶的α - 肽编码区内多克隆位点的两侧。α - 肽的插入失活允许在指示培养基上用颜色直接筛选重组克隆。

f1 复制起始位点:可用于制备单链DNA。


注意事项:

1. 在使用pGEM?-T 和pGEM?-T Easy 载体连接时只能使用本系统提供的
Promega 公司T4 DNA连接酶。其他商用的T4 DNA连接酶可能具有外切
酶活力,造成载体的末端胸腺嘧啶被除去。
2. 2×快速连接缓冲液含有ATP,在温度波动时ATP易降解。可将缓冲液分
装成一次用量的小管,这样可避免反复冻融及经常的温度变化。
3. 在每次使用2×快速连接缓冲液时一定要用混悬器混匀。
4. 长孵育时间可增加转化子的数目,一般4℃孵育过夜可得到更多的转化子。
5.一定要使用高效率的感受态细胞(1×108cfu/μg DNA)进行转化,建议使用JM109 高效感受态细胞(产品目录号:L2001)

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说明书

参考文献

本产品可用于的实验

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