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亲和层析中的填料和标准物。

亲和层析填料是将亲和配基通过化学键接在层析介质上而得到的。常用层析介质并不能直接和亲和配基化学结合,一般先要进行活化或功能化,即要引入反应基团。活化后的层析介质能够通过反应基团和亲和配基反应,从而制备出亲和层析介质。因而亲和层析的制备至少应包括以下几步:

(1)介质和配基选择 (2)介质的活化或功能化 (3)活化的介质和亲和配基的偶联,偶联后未发生偶联反应的反应基团必须封闭或钝化。 (4)洗涤除去未反应的配基和其他反应物。

介质是亲和配基附着的基础,起着支撑和骨架作用。通常而言,亲和色谱的介质应具备下面四个条件 :(1)具有多孔网络结构;(2)非特异吸附小且化学性质呈惰性,表面电荷尽可能低;(3)理化性质稳定,不因共价偶联反应的条件及吸附条件的变化而发生变化;(4)基质必须能够活化或功能化。

常见的介质有:多糖类:主要由纤维素(cellulose)、葡聚糖(dextrin)和琼脂糖(agarose)等制备而成的基质。聚丙烯酰胺凝胶也是一种常用的亲和层析介质。亲和层析可以使用的无机基质主要有可控制孔径多孔玻璃(CPG)、陶瓷和硅胶等。无机基质有其本身的优点。

选作配基的分子必须具有适当的化学基团,基团不参与配基与生物分子的特异结合,但是却可以用来连接配基与载体。

将亲和配基共价偶联在载体的表面,即可制得亲和吸附介质。一般凝胶过滤介质均可作为亲和配基的载体来制备亲和吸附介质。



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