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蛋白染料

SDS-PAGE 实验中聚丙烯酰胺凝胶内蛋白检测用染料,在可见光或紫外光激发下可显出蛋白条带,方便肉眼观察或成像用。

常用的蛋白凝胶染料有考马斯亮蓝、银染、负染(铜染、锌染)、荧光蛋白染色剂。

考马斯亮蓝分为R-150、R-250、R-350、G-250等。其中R-350最为灵敏,R为红蓝色,G为绿蓝色。R-250即三苯基甲烷,每个分子含有两个SO3H基团,偏酸性,与氨基黑一样也是结合到蛋白质的碱性基团上。G-250即二甲花青亮蓝,是一种甲基取代的三苯基甲烷。

银染的原理是在碱性条件下,用甲醛将蛋白带上的硝酸银(银离子)还原成金属银,以使银颗粒沉积在蛋白带上。染色的程度与蛋白中的一些特殊的基团有关,不含或者很少含半胱氨酸残基的蛋白质有时候呈负染。

以铜离子或锌离子为基础的负染色方法,用于SDS-PAGE或非变性胶,不需要固定和脱色,也不需要使用含有刺激性的甲醛和冰醋酸,实验方便快速,可以在30分钟内完成染色,最低能够检测出2ng的蛋白条带,该染色方法不对蛋白质产生任何修饰作用,而且经过消除液处理后,可以用于回收胶中蛋白质。

荧光蛋白染色剂染色时间短,灵敏度高、毒性低,重现性好。

注:考马斯亮蓝染色可以达到0.2~0.5 μg(200~500 ng),最低可检出0.1 μg蛋白;银染的灵敏度比考染高将近100倍,最低可以检出2 ng蛋白。

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